Количественный анализ на гепатит С

Иммунологическая диагностика

Помимо всего прочего, можно определить антитела к гепатиту С. Расшифровка анализа сводится к указанию антител не только ко всем типам изучаемого заболевания, но и к печеночным антигенам.

Такой вариант диагностики может проводиться как в виде обычного исследования, так и посредством экспресс-теста. Для последнего используют как кровь, так и слюну. При окрашивании полоски в определенный цвет (согласно инструкции), можно говорить о наличии антител к гепатиту C у человека. Преимуществом экспресс-тестов является то, что их разрешается выполнять на дому.

Обычно расшифровка исследования сводится к указанию наличия/отсутствия антител к изучаемому заболеванию. Если пришел положительный результат, в организме они имеются. В противном случае говорить о наличии антител к гепатиту и печеночным клеткам нельзя.

Результаты количественного анализа

Задача определения количества вирусной нагрузки в крови пациента – это выявление степени заражения для окружающих.

Результаты анализа ПЦР:

1. Ответ положительный означает наличие в биологическом материале инфекции. Анализ позволяет определить точное количество инфицированных клеток.
2. Отрицательный ответ говорит об отсутствии инфекции, которую тщательно искали в организме.

Метод количественного определения на гепатит С является точным и информативным, проводится на оборудовании с высокой чувствительностью. Расшифровка результатов анализа позволяет узнать есть ли инфекция и ее специфику, увидеть наименьшее количество инфицированных клеток на высокочувствительных анализаторах.

Ложноположительные или противоположные результаты анализ редко выдает, чаще это случается при исследованиях иммуноферментного исследования.

Оставьте комментарий 17,059

Гепатит С — это одно из самых опасных и трудно диагностируемых вирусных заболеваний. Для определения болезни используют метод ПЦР гепатита С. Это новая высокотехнологичная методика, что позволяет исследовать генетический материал на существование жизни в мельчайших частицах (молекулах) и наименьших количествах. Вирус гепатита очень стойкий, он способен долго жить в окружающей среде и отлично приживается в организме человека.

Как подготовиться к исследованию

Чтобы расшифровка анализа ПЦР не была ошибочной, необходимо соответствующим образом подготовиться к забору крови. За некоторым исключением правила не отличаются от таковых при других исследованиях.

Необходимо:

• сдавать кровь строго натощак (последний прием пищи за 12 часов до посещения лаборатории);
• процедуру проводить в первой половине дня (как можно раньше);
• в день анализа после пробуждения пить можно только воду; чай, кофе, газированные и/или сладкие напитки, соки и т.д. противопоказаны;
• за 3–5 часов до сдачи крови нельзя курить;
• если невозможно прервать прием каких-либо медикаментов, сообщить названия принимаемых лекарств лаборанту и врачу, который будет интерпретировать полученные данные.

Наличие гепатита С уже подразумевает полный отказ от спиртного и строгую диету (стол №5). Но если анализ проводится на этапе диагностики, за 5–7 дней до забора крови обязателен контроль питания с исключением тяжелых для печени продуктов и алкоголя.

Для чего проводится на различных этапах течения болезни?

На разных фазах заболевания исследование проводят, чтобы дать рецензию пользы лечения и планированию срока его дальнейшего проведения. При хороших ответах на терапию срок ее сокращают. В противном случае, при медлительном уходе вируса, курс лечения продлевают. ПЦР на гепатит делают на 1,4, 12, 24 неделе терапии. Когда показатели не падают по истечении 12 недель, то делают вывод, что терапия не подходит этому организму. Этот анализ используют для установления, насколько активна инфекция и какая вероятность ее передать. Например, при беременности есть риск заразить малыша. После терапии выявляют риск возобновления болезни.

Расшифровка

После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена. «Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему. Таблица 1. Расшифровка количественного анализа РНК вируса

Цифровое обозначение числа вируса, МЕ/мл	Описание итога
Не обнаружено	Норма для здорового человека. Вирус не найден или исход ниже грани чувствительности методики.
До 1.8*10^2	Обнаружено в концентрации ниже линий границы.
До 8*10^5	Обнаружен вирус при хорошем прогнозе болезни и эффективном лечении. Низкая вирусная нагрузка.
Больше 8*10^5	Обнаружено вирус и большая вирусная нагрузка.
Больше 2,4*10^7	Обнаружен вирус в концентрации выше линейного диапазона.

Для чего проводится на различных этапах течения болезни?

Анализ поможет контролировать результаты терапии на всех стадиях лечения.

На разных фазах заболевания исследование проводят, чтобы дать рецензию пользы лечения и планированию срока его дальнейшего проведения. При хороших ответах на терапию срок ее сокращают. В противном случае, при медлительном уходе вируса, курс лечения продлевают. ПЦР на гепатит делают на 1,4, 12, 24 неделе терапии. Когда показатели не падают по истечении 12 недель, то делают вывод, что терапия не подходит этому организму. Этот анализ используют для установления, насколько активна инфекция и какая вероятность ее передать. Например, при беременности есть риск заразить малыша. После терапии выявляют риск возобновления болезни.

Стоимость пцр

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 10 6 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 10 5 МЕ/мл = 2.2* 10 6 копий/мл.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *10 3 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*10 4 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*10 7 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста.

Что делать пациенту после получения результатов исследования?

После получения результатов исследования образцов крови, пациенту следует отправиться к лечащему врачу. Самостоятельно делать выводы о своем диагнозе и намечать определенное лечение не рекомендуется категорически.

В зависимости от результатов тестирования, гепатолог назначает ту или иную терапевтическую схему с применением активных противовирусных препаратов. В зависимости от определенного аналитическим образом генотипом ВГС, могут назначаться следующие схемы лечения этого опасного заболевания:

• Софосбувир в сочетании с Ледипасвиром при 1, 4, 5 и 6 генотипах;
• Софосбувир и Даклатасвир – при 1, 2, 3 и 4;
• Софосбувир в сочетании с Велпатасвиром – при любом из известных генотипов патогена.

В зависимости от общего состояния организма, концентрации гепатовируса и особенностей поражения, может назначаться терапия длительностью в 12 или 24 недели, с применением Рибавирина или без такового. Пациенту следует приобрести лекарства на весь терапевтический период, так как прерывать его нельзя ни в коем случае. 

Однако вовсе не обязательно копить деньги на дорогие американские лекарства – можно приобрести более дешевые индийские аналоги. Эти препараты изготавливаются по официальной рецептуре. Более низкая стоимость связана с возможностью массового производства препарата. При этом индийские производители настолько уверены в высоком качестве своей продукции, что предоставляют своим покупателям любые гарантии. К примеру, Zydus Heptiza предлагает Гарантию Выздоровления. Это – документ, согласно которому пациент имеет право на повторное лечение за счет компании, если предыдущая терапия не помогла.

Важно! После приобретения лекарства больному необходимо полностью следовать рекомендациям лечащего врача и ежедневно употреблять лекарство в течение всего терапевтического периода

ПЦР диагностика

ПЦР – наиболее распространенный и точный метод определения вируса и его количественных возможностей. Метод способен определять вирусы в разных формах и диагностировать малоизвестные заболевания.

Анализ ПЦР (полимеразной цепной реакции) осуществляется путем забора крови и определения в ней вирусной РНК.

В образцы крови добавляются специфические ферменты и определяются в специальный реактор. Там происходит клонирование клеток.

Сначала одна клетка делится на две копии, потом каждая из копий делится еще на две. Таким образом, после синтеза копий появляются сотни клеток ДНК.

ДНК можно сравнить с базой информации о всевозможных возбудителях и выявить инфекцию на ранних сроках заболевания.

Преимущества ПЦР метода:

• многие методы диагностики выявляют только наличие вируса путем выделения в крови продуктов жизнедеятельности инфекционных микроорганизмов. Метод ПЦР напрямую указывает на возбудителя инфекции;
• специфика ПЦР заключается в том, что в исследуемой пробе крови выявляется уникальный фрагмент ДНК. Это исключает шанс на ложный результат;
• ПЦР способно выявить даже единичные клетки инфекции и диагностировать несколько возбудителей в одной пробе крови.

Качественный анализ

Помогает обнаружить вирус в крови. При положительном результате следует продолжить обследование и провести количественный анализ, который определит стадию болезни, и предоставит врачам возможность спланировать наиболее благоприятную тактику лечения. При проведении данного анализа допускаются только два заключения:

«Обнаружено». Свидетельствует о наличии вируса в крови. Подобный результат считается положительным. В крови уже выявлен РНК вируса, который уже начал развиваться, заражая здоровые клетки и поражая печень.

«Не обнаружено». Говорит о том, что в пробе крови отсутствуют РНК гепатита С. Также существуют случаи, что в исследуемом образце концентрация вируса ничтожно мала и не попадает в рамки чувствительности анализа. Стоит заметить, что анализ выявляет инфекцию на 10-й день после инфицирования, что дает возможность определить вирус еще до его существенных внешних проявлений.

Количественный анализ

Выявляет концентрацию генетического материала вируса в определенном объеме крови. Это не только дает возможность определить тяжесть болезни, но и позволяет увидеть полную клиническую картину заболевания (в том числе при лечении). В результате проведения данного анализа могут быть только 3 заключения:

Результат «Положительный». Результат в числовом показателе отражает вирусную нагрузку. Концентрация вируса определяет количество вируса в 1 миллилитре, что равно 1 кубическому сантиметру крови. Единицы измерения данного анализа МЕ/мл (международные принятые единицы на миллилитр). Если концентрация вирусных частиц меньше 8х10 000 МЕ/мл, то лечение эффективно, если же наоборот, то стоит изменить тактику лечения.
Если вирусная нагрузка в течение первых недель терапии падает до 60 %, то эффективность лечения является высокой. Низкий уровень равен до 400 000 МЕ/мл, а высокий от 1 000 000 МЕ/мл. Вирусная нагрузка определяет степень заболевания и возможность его передачи. При высоком уровне концентрации вирусных клеток в крови риск передачи заболевания вертикальным или же половым путем достаточно велик.

Результат «Недействительный». Этот результат означает, что при качественном анализе вирус в организме был обнаружен, но количественный анализ не смог определить его концентрацию в крови. Такое происходит, когда количество частиц РНК вируса в крови ниже диапазона определения.

Результат «Не обнаружено». Расшифровка анализа означает отсутствие РНК клеток гепатита С в образце крови.

Количественный анализ ПРЦ проводится на всех стадиях болезни. Для выявления оптимального лечения анализы проводятся на сроках: (4-я, 12-я, 16-я, и 24-я неделя). Если по результатам наблюдается снижение вирусной нагрузки, то лечение можно считать эффективным. После завершения терапии количественный анализ проводится для обнаружения рецидива, то есть, обнаружения вируса после снижения его активности до минимума.

ПЦР-анализ и его виды

Быстрый и точный ПЦР-анализ ищет возбудителя следующим образом: при исследовании существенно увеличивается часть ДНК вируса в образце крови. Взятую у человека кровь помещают в особые реактивы, и начинается клонирование клеток. Появление сотен ДНК позволяет обнаружить возбудителя еще на ранней стадии.

ПЦР-анализ бывает нескольких видов:

• Качественный анализ. Это исследование показывает, что в крови присутствуют гены-«вредители». Качественный анализ подтвердил опасения? Значит, следует провести количественное исследование, чтобы установить степень развития вируса. Результат обозначается простыми словами: «обнаружено» или «не обнаружено». В первом случае в организме пациента найдены РНК вируса, значит, человек уже болен. Во втором случае кровь чиста от гена вируса. Чтобы не оставалось сомнений, специалисты рекомендуют спустя 10 дней сдать повторный анализ.
• Количественный анализ. Такой вид исследования определяет, в каком количестве в крови присутствуют гены вируса, насколько тяжелая степень у заболевания. О результате говорят слова «положительно», «отрицательно» и «недействительный».
  1. Под словом «положительно» понимается инфекционная нагрузка. Такой метод диагностики нужен медикам, чтобы отслеживать, действует ли терапия. Время проведения анализа — 4, 12, 16 и 24 недели болезни. Показатель, не превышающий 8х10т МЕ/мл, свидетельствует об эффективности лечения.
  2. Результат «отрицательно» говорит, что ген инфекции отсутствует.
  3. «Недействительный» бывает тогда, когда ген вируса был обнаружен при качественном исследовании, но количественный анализ его не выявил. Такое случается при объеме инфекции ниже уровня.

Не все пациенты сдают количественный анализ (в этом его отличие от качественного). Если качественный подтверждает или опровергает присутствие «врага», то количественный подтверждает диагноз, помогает спрогнозировать развитие заболевания и определиться с терапией.

Количество РНК до начала лечения и во время терапии демонстрирует эффективность работы с пациентом. Кроме того, по числу РНК врачи понимают, какие дозы лекарств нужны больному.

Когда делается показания к исследованию

В подтверждение ВГС назначается анализ ПЦР (полимеразная цепная реакция). Исследования ПЦР помогают найти материал возбудителя в структуре РНК и назначить эффективную терапию. Назначается в следующих случаях:

• выявление признаков воспаления печени;
• скрининговые исследования с целью профилактики;
• обследование контактирующих людей;
• диагностирование гепатитов смешанного происхождения (определение главного возбудителя);
• определение уровня активности размножения вируса при хронической форме;
• цирроз печени;
• для определения эффективности назначенного лечения.

Существует качественный, а также количественный анализ ПЦР. Количественный ПЦР показывает процентное соотношение РНК с носителями вируса в крови, а качественный указывает на вирусное присутствие либо отсутствие. Положительный показатель качества (присутствия РНК гепатита С) нуждается и в количественном исследовании. Высокий уровень концентрации возбудителя гепатита С сопряжена с риском его передачи, то есть заражения окружающих. Низкие показатели количества лучше поддаются лечению. Количество РНК-вирусов в составе крови никак не связано с интенсивностью заболевания. Делается анализ ПЦР и в случае интерфероновой терапии, чтобы назначить продолжительность и сложность лечебного курса.

Расшифровка анализа ПЦР на гепатит С

Вся расшифровка анализов основана на сведениях полученных ранее. Благодаря лабораторным исследованиям в большинстве случаев обозначаются такие данные:

• тест обычно называется Real-time;
• обозначается цифра генотипа;
• к-во фракций с РНК;
• найдено или не найдено.

Самым важным при расшифровке данного анализа есть пункт под номером 3. Он позволяет увидеть вирусную нагрузку, от которой зависит продолжительность лечебных процедур, и дальней шее состояния пациента, а также его время его выздоровления.

Результаты исследований показывают цифру генотипа а также иногда можно увидеть латинскую букву, которая является определителем субгенотипа вируса. Чтобы доктор мог поставить правильный диагноз и назначить лечение ему необходимо знать генотип заболевания, этого будет достаточно для проведения дальнейших действий.

Виды метода ПЦР

Качественное тестирование поможет определить присутствие вируса гепатита С в организме.

Выделяют качественный и количественный анализ на гепатит. Чтобы определить, находится ли вирус в организме, и тем, у кого нашли антитела к гепатиту С, проводят качественное тестирование. Расшифровка анализа выдает итог: «положительно»; «отрицательно». Негативное значение означает: либо человек здоров, либо агентов в крови еще недостаточно и их невозможно найти. Поэтому стоит провести повторное исследование через некоторое время.

Положительный результат говорит о существовании инфекции. Это практически всегда точное значение. Ошибочные результаты зависят обычно от человеческого фактора (неправильное хранение или несоблюдение правил проведения методики). Когда норма, итог — отрицательный. Перед проведением тестирования особых правил нет, просто берут кровь с вены.

Ежели нашли, проводят количественный анализ (вирусная нагрузка) — он дает числовые значения: сколько РНК вируса гепатита находится на данное время в установленном объеме исследуемого материала. При активном развитии инфекции ее можно обнаружить на 1−2 неделе у зараженного человека. Обычно исследуют также кровь, потому что агенты в ней свободно циркулируют.

01 Принципы диагностики ВГС

Серологическая диагностика гепатита С основана на обнаружении в образцах плазмы крови человека уникальных маркеров вируса гепатита С: антител к антигенам ВГС, относящихся к иммуноглобулинам классов G и M (анти-ВГС-IgG и анти-ВГС-IgM), и нуклеиновой кислоты возбудителя (РНК ВГС).

Принцип метода основан на обнаружении в исследуемом материале специфичных фрагментов ДНК (РНК) различных биологических объектов, их избирательном синтезе и дальнейшей детекции продуктов реакции амплификации этих фрагментов.

Количественные модификации ПЦР дают представление о ВН, имеющей решающее значение для прогноза и контроля терапии вирусного гепатита С.

Расшифровка

После проведения исследования расшифровать анализ могут не в цифрах, а словами: «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено». Количественный ПЦР более чувствителен качественного. Вывод «не обнаружено» может говорить, что инфекция не найдена. «Ниже диапазона измерений» — испытание не нашло вирус, но он есть в малой величине. В этой ситуации делают повторное исследование.

Вирусная нагрузка — определение числа инфекционного РНК в установленном объеме крови (количественно 1мл=1куб.сан). Формулируется в интернациональных замерах МЕ/мл. Отдельные лаборатории обозначают копии/мл. Расшифровать перевод компонентов в межнациональные значения различные тест-системы могут по-своему. Таблица 1. Расшифровка количественного анализа РНК вируса

Цифровое обозначение числа вируса, МЕ/мл	Описание итога
Не обнаружено	Норма для здорового человека. Вирус не найден или исход ниже грани чувствительности методики.
До 1.8*10^2	Обнаружено в концентрации ниже линий границы.
До 8*10^5	Обнаружен вирус при хорошем прогнозе болезни и эффективном лечении. Низкая вирусная нагрузка.
Больше 8*10^5	Обнаружено вирус и большая вирусная нагрузка.
Больше 2,4*10^7	Обнаружен вирус в концентрации выше линейного диапазона.

Расшифровка

Количественный анализ ПЦР поможет спрогнозировать возможные риски для здоровья больного и окружающих.

Найденное в крови количество HCV, влияет на вероятность, с которой вирус гепатита передается окружающим — чем выше, тем больше вероятность. За счет этой процедуры составляется правильный план дальнейшего лечения. Полученные в ходе процедуры результаты измеряются в единицах МЕ/мл и копий/мл. Расшифровать показатели можно только после пересчета полученного количества с учетом коэффициента (КП). Есть 2 метода:

• HCV Monitor с КП в МЕ — 2,7;
• LCX HCV RNA с КП — 3,8.

Таблица № 1. Расшифровка полученных данных анализа на гепатит

МЕ/мл	Результаты количественного ПЦР
Норма.
До 1,8*10 в ст. 2	Вирус найден, но количество ниже допустимой границы
До 8*10 в ст. 5	Найден вирус, при необходимом плане лечения — низкая нагрузка на организм
Выше 8*10 в ст. 5	Выявлен вирус с высокой вирусной нагрузкой
Выше 2,4*10 в ст. 7	Вирус в концентрации, что превосходит уровень допустимого

Чтобы расшифровать генотип вируса, используются латинские или римские цифры с буквами. Каждая модификация патогена имеет свои особенности, что определяют дальнейшую схему лечения. Бывает, что у пациента по методу ПЦР не обнаружено антител в крови, а ИФА показывает, что они есть. Тогда говорят, что больной переболел острой формой гепатита С с самоизлечением.

Таблица № 2. Расшифровка результатов генотипирования:

Результаты	Значение
Генотипы 1а, 1b	Очень высокий риск хронизации инфекции и развития тяжелых осложнений
Генотипы 2, 3а	В большинстве случаев в течение 24 недель достигается планированный терапевтический эффект
Генотип 4	Труднее поддается лечению, требует доз препаратов, отличных от применяемых при терапии с генотипами 2 или 3

Норма показателей

Для подтверждения диагноза рекомендовано пройти биохимическое исследование крови.

Нормой считается показатель число, которого равно нулю, что свидетельствует об отсутствие вируса в крови человека. Для зараженных людей понижение вирусной концентрации считается приближением к здоровому состоянию. Если показатели варьируются от 600 МЕ/мл до 3*10 в ст. 4 МЕ/мл, то применяемое лечение считается успешным.

Отклонения и причины их возникновения

Если происходит изменения результатов и их выхождения за рамки нормы, значит, произошел рецидив. Это говорит о том, что заболевание снова прогрессирует и количество вируса в организме постепенно увеличивается. Результаты во многом зависят от тех, кто делает анализы. Ошибочные они в случае, если образец с кровью подвергся загрязнению или присутствовали ошибки в проведении анализа. Дополнительной причиной становится присутствие в крови веществ, направленных на замедление реакции ПЦР

Важно заметить, что для точного результата необходимы другие анализы: биопсия и биохимическое исследование